一、 研究目的近来研究发现非小细胞肺癌患者中存在除EGFR 突变及KRAS 突变之外的另一个重要的酪氨酸激酶抑制剂的作用靶点--EML4-ALK 融合基因,即棘皮动物微管结合蛋白4（echinoderm microtubule associated protein-like 4，EML4）与间变淋巴瘤激酶（anaplastic lymphomakinase，ALK）融合基因。
这一融合基因表达阳性的肺癌患者可以受益于ALK 抑制剂的治疗。
本课题旨在构建EML4-ALK或KIF5B-RET稳转细胞株，通过酚羟基邻位修饰基团连接RGD，做靶向和治疗实验。
二、 采用的研究方法EML4-ALK 融合基因检测方法：PCR技术( polymerase chain reaction )，Beacon荧光探针检测法。
蛋白质印迹法(western blot)检测EML4-ALK相关信号转导蛋白。
三、 实验方案抑制肿瘤相关融合蛋白EML4-ALK表达的方法：○1 分别采用实时荧光定量PCR和Beacon荧光单针的方法检测细胞中EML4-ALK的表达。
○2 BIM肿瘤凋亡基因的表达量增大能够抑制EML4-ALK融合蛋白的表达，而Mir-301a与BIM基因的转录与表达负相关，因此我们使用Mir-301a的反义RNA来沉默其表达，从而抑制Mir-301a，提高细胞内BIM水平，达到抑制肿瘤相关融合蛋白EML4-ALK的表达的目的。
○3 EML4-ALK融合蛋白的下游信号转导分子主要为Erk和STAT3，因此我们使用与EML4-ALK的mRNA反向互补的Beacon探针来抑制其mRNA的转录，从而向下调控EML4-ALK的表达、Erk和STAT3的磷酸化。
四、 文献综述1、EML4-ALK融合基因的背景资料EML4－ALK融合基因 是由Soda 等于2007年首次在非小细胞肺癌中发现的一个新型的融合基因，此融合基因由棘皮动物微管相关蛋白样4( echinoderm microtubule － associated protein － like 4，EML4) 和间变性淋巴瘤激酶( anaplastic lymphoma kinase，ALK) 两者的部分基因相互融合而成。
ALK是一个由细胞外配体结合区、跨膜区及胞内酪氨酸激酶区组成的1， 620 个氨基酸的跨膜蛋白，属于胰岛素受体家族。
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